Avaliação e adaptação do teste Western Blot para análise do líquido cefalorraquiano na mielopatia associada ao  HTLV-I / paraparesia espástica tropical

Gonçalves, Cássia Cristina Alves

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Centro de Ciências Biológicas e da Saúde (CCBS)
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Medicina
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MEDI - Dissertações de Mestrado
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dc.contributor.advisor	Sohler, Marzia Puccioni
dc.contributor.author	Gonçalves, Cássia Cristina Alves
dc.date.accessioned	2018-09-17T17:11:49Z
dc.date.available	2018-09-17T17:11:49Z
dc.date.issued	2007-09-28
dc.identifier.citation	GONÇALVES, Cássia Cristina Alves. Avaliação e adaptação do teste Western Blot para análise do líquido cefalorraquiano na mielopatia associada ao HTLV-I / paraparesia espástica tropical. 2007. 91 f. Dissertação (Mestrado em Neurologia) - Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2007.	pt_BR
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/unirio/12478
dc.description.sponsorship	n/a	pt_BR
dc.language.iso	Portuguese	pt_BR
dc.rights	openAccess	pt_BR
dc.title	Avaliação e adaptação do teste Western Blot para análise do líquido cefalorraquiano na mielopatia associada ao HTLV-I / paraparesia espástica tropical	pt_BR
dc.title.alternative	Evaluation and adaptation of the Western Blot test for cerebrospinal fluid analysis in HTLV-I associated myelopathy / tropical spastic paraparesis	pt_BR
dc.type	masterThesis	pt_BR
dc.contributor.advisor-co	Carvalho, Silvia Maia Farias de
dc.contributor.referee	Sohler, Marzia Puccioni
dc.contributor.referee	Sá, Carlos Alberto Morais de
dc.contributor.referee	Simonetti, José Pascoal
dc.degree.department	CCBS	pt_BR
dc.degree.grantor	Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro - UNIRIO	pt_BR
dc.degree.level	Mestrado Acadêmico	pt_BR
dc.degree.local	Rio de Janeiro, RJ	pt_BR
dc.degree.program	Programa de Pós-Graduação em Neurologia	pt_BR
dc.subject.cnpq	CIÊNCIAS DA SAÚDE	pt_BR
dc.subject.cnpq	MEDICINA	pt_BR
dc.subject.cnpq	NEUROLOGIA	pt_BR
dc.subject.en	Cerebrospinal Fluid	pt_BR
dc.subject.en	HAM/TSP	pt_BR
dc.subject.en	Intrathecal synthesis	pt_BR
dc.subject.en	HTLV-1	pt_BR
dc.subject.en	Western Blot	pt_BR
dc.description.abstracten	Introdution: Human lymphotropic virus type I (HTLV-I) was the first retrovírus it be isolated. This virus is associated with adult T-cell leukemia and a chronic progressive neurologic disease known as HTLV-I- associated myelopathy-tropical spastic paraparesis (HAM/TSP). HAM/TSP is a neurologic syndrome characterized by slowly progressive spastic paraparesis associated with mild sensory abnormalities and disturbances of bladder function. Symptoms frequent consist of: asymmetrical weakness of lower members, backache, urinary incontinence and impotence. The laboratory diagnosis is based on the presence of antibodies to HTLV-I in both serum and cerebrospinal fluid (CSF). Western blot (WB) assays identifies antibodies against specific viral proteins and is used, primarily in the periphral compartment (serum or plasma) as a confirmatory test of HTLV-I infection. In the LCR is important the identification of the origin of the antibodies, if originating from the serum or of intrathecal synthesis (produced in the central nervous system), and against which protein of the virus are being produced. It has been shown that WB assays may identify specific viral proteins and can be used as an indication of productive central nervous system (CNS) infection. We present an analysis of WB assays as an auxiliary tool for the study of intrathecal synthesis of anti-HTLV-I antibodies. Objective: The present study aims to adapt the WB test for analysis of intrathecal synthesis of HTLV-I antibodies in HAM/TSP and to demonstrate which specific proteins are synthesized in the central nervous system. Methods CSF and serum samples of a patient with the diagnosis of HAM/TSP attended in the HUGG/UNIRIO were analyzed. The CSF exam included cytology, biochemical, intra-blood-CSF barrier and IgG index and ELISA test for HTLV-I. The serum samples were previously diluted at the same concentration of total IgG in the CSF. We then performed paired CSF and serum Western blot assays for HTLV-I antibodies (HTLV-BLOT 2.4 – Genelabs Diagnostics). Presence of more intense bands in the CSF, when compared to serum, or bands visualized only in the CSF was considered indicative of local synthesis. Results: Attempt of the WB test were carried out in the search of an ideal dilution that could verify the presence of bands in the LCR, test of the synthesis intratecal of specific antibody. The ideal dilution found was shown in the assay that included the following reasons: 1:2, 1:4, 1:8 and 1:16. The test of WB carried out, showed more intense impregnation in the strip of nitrocelulose of antibodies against proteins: rgp46-I, p24, gp21 and GD21 in sample of CSF than in the serum, in identical dilutions. Different rate the same patient had been repeated four times in alternate days and same result was obtained. Conclusion: The test of WB showed to be an instrument of evaluation for intrathecal synthesis of specific antibodies to HTLV-I. Its use provided the identification of the immunological answer to the proteins of the HTLV-I virus envelope (rgp46-I, GD21, gp21) and core (p24) in the SNC.	pt_BR
dc.degree.country	Brasil	pt_BR
dc.description.sponsordocumentnumber	n/a	pt_BR
dc.description.abstractpt	Introdução: O vírus linfotrópico de células T humanas do tipo I (HTLV-I) foi o primeiro retrovírus a ser isolado em seres humanos. O vírus tem sido associado a um tipo de doença linfoproliferativa humana denominada leucemia/linfoma de células T do adulto e a um tipo de mielopatia crônica progressiva, a mielopatia associada ao HTLV-I ou paraparesia espástica tropical (HAM/TSP). A HAM/TSP é mielopatia de progressão lenta. Durante a evolução da doença ocorre em geral um período de estabilidade com duração de vários anos. Sintomas freqüentes consistem em: fraqueza assimétrica de membros inferiores, lombalgia, incontinência urinária e impotência. O diagnóstico laboratorial da HAM/TSP baseia-se na demonstração da presença de anticorpos anti-HTLV-I no soro e líquido cefalorraquiano (LCR). O método de Western blot (WB) identifica anticorpos contra proteínas virais específicas e vem sendo utilizado como teste confirmatório da infecção primariamente no compartimento periférico (soro ou plasma). No LCR é importante a identificação da origem dos anticorpos, se provenientes do soro ou de síntese intratecal (produzidos no sistema nervoso central), e contra qual proteína do vírus estão sendo produzidos. Apresentamos uma avaliação do método de WB no LCR como ferramenta auxiliar para o estudo da síntese intratecal de anticorpos anti-HTLV-I. Objetivo: O presente estudo consiste em adaptar o teste de WB para análise de síntese intratecal de anticorpos para HTLV-I na HAM/TSP e demonstrar quais as proteínas estudadas no teste WB que provocam resposta imunológica no sistema nervoso central (SNC). Materiais e Métodos: Amostras de LCR e soro de uma paciente com o diagnóstico de HAM/TSP atendida no HUGG/UNIRIO foram repetidamente analisadas. O exame de rotina do LCR incluiu citologia, bioquímica, barreira hemato-LCR, índice de IgG e teste de ELISA para HTLV-I/II. As amostras de soro foram previamente diluídas conforme concentração de IgG total do LCR. Com base nestes dados realizou-se analise pareada de LCR e soro utilizando o teste WB para HTLV-I (HTLV-BLOT 2.4 - Genelabs Diagnostics). Presença de bandas mais intensas no LCR do que soro ou visualizadas unicamente no LCR foram consideradas indicativas de síntese local de anticorpo específico. Resultados: Ensaios do teste de WB foram realizados na busca de uma diluição ideal que pudesse verificar a presença de bandas no LCR como prova da síntese intratecal de anticorpo específico. A diluição ideal encontrada foi demonstrada no ensaio que incluí as seguintes razões: 1:2, 1:4, 1:8 e 1:16. O teste de WB realizado mostrou impregnação mais intensa na tira de nitrocelulose de anticorpos contra proteínas: rgp46-I, p24, gp21 e GD21 em amostras de LCR do que nas do soro, em idênticas diluições. O teste foi repetido em alíquotas diferentes da mesma paciente quatro vezes em dias alternados e o mesmo resultado foi obtido. Conclusão: O teste de WB é instrumento preciso que pode seu utilizado para avaliação da síntese intratecal de anticorpos específicos para HTLV-I. No SNC, ocorre resposta imunológica específica no SNC às proteínas de envelope do vírus HTLV-I (rgp46-I, GD21, gp21) e do core (p24).	pt_BR
dc.subject.pt	Liquido cefalorraquidiano	pt_BR
dc.subject.pt	HAM/TSP	pt_BR
dc.subject.pt	Síntese intratecal	pt_BR
dc.subject.pt	HTLV-1	pt_BR
dc.subject.pt	Western Blot	pt_BR