Determinantes genéticos de virulência entre amostras de Enterococcus isoladas de pacientes hospitalizados no Espírito Santo

Leite, Vitor Luis Macena

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BIOM - Trabalhos de Conclusão de Curso - Graduação
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dc.contributor.advisor	Teixeira, Lúcia Martins
dc.contributor.author	Leite, Vitor Luis Macena
dc.date.accessioned	2018-11-05T18:38:47Z
dc.date.available	2018-11-05T18:38:47Z
dc.date.issued	2018-07-27
dc.identifier.citation	LEITE, Vitor Luis Macena. Determinantes genéticos de virulência entre amostras de Enterococcus isoladas de pacientes hospitalizados no Espírito Santo. 2018. 96 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Biomedicina) - Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro, Instituto Biomédico., Rio de Janeiro, 2018.	pt_BR
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/unirio/12543
dc.description.sponsorship	CNPQ, CAPES e FAPERJ	pt_BR
dc.language.iso	Portuguese	pt_BR
dc.rights	openAccess	pt_BR
dc.title	Determinantes genéticos de virulência entre amostras de Enterococcus isoladas de pacientes hospitalizados no Espírito Santo	pt_BR
dc.title.alternative	Genetic determinants of virulence between Enterococcus samples isolated from patients hospitalized in Espírito Santo	pt_BR
dc.type	bachelorThesis	pt_BR
dc.contributor.referee	Teixeira, Lúcia Martins
dc.contributor.referee	Saramago, Carmen Soares de Meirelles
dc.contributor.referee	Silva, Marco Aurélio Peregrino da
dc.contributor.referee	Souza, Stephanie da Silva Rodrigues de
dc.degree.department	CCBS-Instituto Biomédico	pt_BR
dc.degree.grantor	Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro - UNIRIO	pt_BR
dc.degree.level	Graduação	pt_BR
dc.degree.local	Rio de Janeiro, RJ	pt_BR
dc.degree.program	Bacharelado em Biomedicina-CCBS	pt_BR
dc.subject.cnpq	Outros	pt_BR
dc.subject.cnpq	Biomedicina	pt_BR
dc.subject.en	Enterococcus	pt_BR
dc.subject.en	Cross Infection	pt_BR
dc.subject.en	Virulence	pt_BR
dc.subject.en	Drug Resistance, Multiple	pt_BR
dc.description.abstracten	The emergence of bacteria from Enterococcus genus as important nosocomial pathogens over the past decades reflects the need to further investigate the factors involved on these infections’ pathogenesis. Among these factors we can list the growing antibiotic resistance following these infections and the expression of virulence factors that contributes to their establishment and development. The present study aimed to investigate the presence of the major virulence genetic determinants between 106 Enterococcus spp. samples isolated from patients hospitalized at two health care facilities at Cachoeiro de Itapemirim, Espírito Santo. By using multiplex PCR, the following genes were investigated: asa1 (aggregative substance), enterococcal surface protein (esp), clyA (cytolysin), gelE (gelatinase) and hyl (glycoside-hydrolase). The samples were collected between September 2016 and September 2017, among which 63 (59.4%) were isolated from hospital A and 43 (40.6%) from hospital B. The identified species, using MALDI-TOF-MS, were Enterococcus faecalis [77 (72.6%)], Enterococcus faecium [24 (22.6%)], Enterococcus avium [3 (2.8%)] e Enterococcus gallinarum [2 (1.9%)]. The most frequent sources of specimens were urine [40 (37.7%)], rectal swab [27 (25.5%)] and blood [20 (18.9%)]. The samples were also tested for their susceptibility to 18 different antimicrobials, as well as the multiresistance profile frequency among them. The following resistance results were observed: ampicillin (19.8%), ciprofloxacin (61.3%), chloramphenicol (34.0%), erythromycin (73.6%), streptomycin (10.4%), fosfomycin (2.8%), gentamicin (42.5%), levofloxacin (60.4%), nitrofurantoin (22.6%), norfloxacin (62.3%), penicillin (42,5%), quinupristin/dalfopristin (68.9%), rifampicin (40.6%), teicoplanin (43.4%), tetracycline (64.2%) e vancomycin (45.3%). According to these results, 83 samples (78.3%) showed multiresistance profiles and all of them were susceptible to linezolid and tigecycline. The genetic diversity of these samples was analyzed by the chromosomal DNA fragmentation profiles after digestion with SmaI restriction enzyme and pulsed field gel electrophoresis. Three prevailing clonal groups were detected, one of them being E. faecalis, mainly represented by VRE samples with the virulence genetic profile composed by gens asa1, clyA and gelE; the two remaining groups encompassing E. faecium, mainly VRE samples presenting the virulence genetic determinants esp and hyl. Among the samples neither identified as E. faecium nor as E. faecalis, a single sample of vancomycin-resistant E. avium carrier of esp gene was identified, besides two vancomycin-resistant samples of E. gallinarum not carrying any of the virulence genes investigated. The present study is the first to further investigate the occurrence of of virulence factors and the genetic diversity of Enterecoccus isolates circulating in these hospitals, thereby contributing to better comprehension of the epidemiology of an important nosocomial pathogen that has been a major concern and target of key public health strategies. The results give critical insights needed to improve and develop alternatives for controlling these enterococcal infections, once the current therapeutical approaches are highly overrated.	pt_BR
dc.description.sponsordocumentnumber	n/a	pt_BR
dc.description.abstractpt	A emergência das bactérias do gênero Enterococcus como importantes patógenos nosocomiais nas últimas décadas reflete a necessidade de se investigar os fatores envolvidos na patogênese das infecções causadas por esses microrganismos. Entre esses fatores estão a crescente resistência aos antimicrobianos, que acompanha essas infecções ao longo dos anos, e a expressão de fatores de virulência que contribuem para a instalação e desenvolvimento das mesmas. Para esse estudo, foi investigada a presença dos principais determinantes genéticos de virulência do gênero entre 106 amostras de Enterococcus spp. isoladas de pacientes de dois hospitais de Cachoeiro de Itapemirim, Espírito Santo. Através de PCR-Multiplex, foram pesquisados os seguintes genes: asa1 (substância agregativa), esp (proteína de superfície de Enterococcus), cylA (citolisina), gelE (gelatinase) e hyl (glicosil-hidrolase). Tais amostras foram obtidas no período entre setembro de 2016 e setembro de 2017, das quais 63 (59,4%) foram isoladas no hospital A e 43 (40,6%) no hospital B. As espécies identificadas por MALDI-TOF-MS foram Enterococcus faecalis [77 (72,6%)], Enterococcus faecium [24 (22,6%)], Enterococcus avium [3 (2,8%)] e Enterococcus gallinarum [2 (1,9%)]. As fontes de isolamento mais frequentes foram urina [40 (37,7%)], swab retal [27 (25,5%)], e sangue [20 (18,9%)]. Também foi feita a investigação da susceptibilidade dessas amostras a um painel de 18 antimicrobianos, bem como da frequência de multirresistência entre elas. Foram observados os seguintes percentuais de resistência: ampicilina (19,8%), ciprofloxacina (61,3%), cloranfenicol (34,0%), eritromicina (73,6%), estreptomicina (10,4%), fosfomicina (2,8%), gentamicina (42,5%), levofloxacina (60,4%), nitrofurantoína (22,6%), norfloxacina (62,3%), penicilina (42,5%), quinupristina/dalfopristina (68,9%), rifampicina (40,6%), teicoplanina (43,4%), tetraciclina (64,2%) e vancomicina (45,3%). Constatou-se que 83 (78,3%) amostras apresentaram multirresistência e todas foram susceptíveis a linezolida e tigeciclina. A diversidade genética das amostras foi avaliada através da análise dos perfis de fragmentação do DNA cromossômico, empregando a enzima de restrição SmaI e eletroforese em campo pulsado. Foram detectados três grupos clonais predominantes entre as amostras do estudo, sendo um de E. faecalis, definido, em maioria, por amostras VRE e portadoras do perfil genético de virulência formado pelos genes asa1, cylA e gelE; e os outros dois englobando amostras de E. faecium, em sua maioria VRE e carreadoras dos determinantes genéticos de virulência esp e hyl. Entre as amostras não-E. faecium e não-E. faecalis, uma única amostra de E. avium resistente à vancomicina e portadora do gene esp foi identificada, assim como duas amostras de E. gallinarum resistentes à vancomicina, no entanto, não apresentando nenhum dos genes de virulência aqui analisados. Esse estudo é pioneiro sobre a pesquisa de determinantes genéticos associados a virulência e sobre a diversidade genética de amostras de Enterococcus circulantes nesses hospitais, contribuindo para compreensão da epidemiologia de um importante patógeno nosocomial que vem sendo alvo de importantes ações de saúde pública que visam enfrentá-lo, sendo assim, útil para o desenvolvimento e emprego de alternativas que visem o controle dessas infecções enterocócicas, considerando que as abordagens terapêuticas para essas enfermidades já se encontram altamente limitadas.	pt_BR
dc.subject.pt	Enterococcus	pt_BR
dc.subject.pt	Infecção Hospitalar	pt_BR
dc.subject.pt	Virulência	pt_BR
dc.subject.pt	Resistência a Múltiplos Medicamentos	pt_BR