Canabinoides modulam a morte e a proliferação celular em culturas de células da retina embrionária de aves através de receptores de nucleotídeos P2X7 e P2Y12

Diniz, Geyzzara Oliveira Ferreira

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dc.contributor.advisor	França, Guilherme Rapozeiro
dc.contributor.author	Diniz, Geyzzara Oliveira Ferreira
dc.date.accessioned	2019-03-28T18:29:45Z
dc.date.available	2019-03-28T18:29:45Z
dc.date.issued	2018-12-18
dc.identifier.citation	DINIZ, Geyzzara Oliveira Ferreira. Canabinoides modulam a morte e a proliferação celular em culturas de células da retina embrionária de aves através de receptores de nucleotídeos P2X7 e P2Y12. 2018. 52 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Biomedicina) - Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro, Instituto Biomédico., Rio de Janeiro, 2018.	pt_BR
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/unirio/12718
dc.description.sponsorship	n/a	pt_BR
dc.language.iso	Portuguese	pt_BR
dc.rights	openAccess	pt_BR
dc.title	Canabinoides modulam a morte e a proliferação celular em culturas de células da retina embrionária de aves através de receptores de nucleotídeos P2X7 e P2Y12	pt_BR
dc.title.alternative	Canabinoids modulate death and cell proliferation in cultures of embryonic retinal cells of birds through P2X7 and P2Y12 nucleotide receptors	pt_BR
dc.type	bachelorThesis	pt_BR
dc.contributor.advisor-co	Ventura, Ana Lúcia Marques
dc.contributor.referee	França, Guilherme Rapozeiro
dc.contributor.referee	Fragel-Madeira, Lucianne
dc.contributor.referee	Albuquerque, Cassiano Felippe G. de
dc.contributor.referee	Ventura, Ana Lúcia Marques
dc.degree.department	CCBS-Instituto Biomédico	pt_BR
dc.degree.grantor	Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro - UNIRIO	pt_BR
dc.degree.level	Graduação	pt_BR
dc.degree.local	Rio de Janeiro, RJ	pt_BR
dc.degree.program	Bacharelado em Biomedicina-CCBS	pt_BR
dc.subject.cnpq	Outros	pt_BR
dc.subject.cnpq	Biomedicina	pt_BR
dc.subject.en	Cannabinoids	pt_BR
dc.subject.en	Receptors, Purinergic	pt_BR
dc.subject.en	Retina	pt_BR
dc.subject.en	Receptors, Purinergic P2X7	pt_BR
dc.subject.en	Receptors, Purinergic P2Y12	pt_BR
dc.description.abstracten	In this work we investigate the actions of cannabinoids and their relationship with the purinergic system on cell proliferation and viability using as model embryonic retinal cell cultures. Cultures in E7C1 were treated with WIN 55,212-2, an agonist of CB1 and CB2 receptor, URB 602, a MAGL enzyme inhibitor, and with ATP and ADP. WIN and URB 602 inhibited the proliferation of both control cultures and cultures treated with ATP and ADP. The decrease on proliferation suggests cell cycle arrest, differentiation, and/or cell death. In the chick retina has been described that the P2X7 receptors are related to cell death phenomena. To investigate the involvement of P2X7 receptors in WIN induced cell death, cultures in E7C1 were treated with WIN and A438079, a P2X7 receptor inhibitor, and subjected to the cell viability assay. WIN decreased cell viability in a dose-dependent manner, an effect that was completely blocked by A438079. However, A438079 did not reverse the effect of WIN on [3H]-thymidine incorporation, suggesting that the participation of P2X7 receptors in WIN-treated cultures is restricted to phenomena of cell death. One of the ways to study the activity of P2X7 receptors is through fluorescent dye uptake assays. E7C1 cultures treated with WIN for 24h showed a ~2x increase in the number of cells positive for fluorescent dye sulforhodamine B (SRB). In addition, cultures pre-incubated with WIN for 24h and stimulated with 3mM ATP for 10 min showed a ~4x increase in the number of SRB-positive cells, this effect being totally blocked by A438079. In rat retina it has been described that the P2Y12 receptor is involved with the cell cycle output. Cultures of E7C1 were treated with WIN and PSB 0739, a P2Y12 receptor antagonist and subjected to the [3H] -thymidine incorporation assay. PSB 0739 inhibited the effect of WIN on proliferation. Our results suggest that cannabinoids have an inhibitory effect on cell proliferation, with a reversible effect on nucleotide-induced proliferation. They also induced the death of retinal progenitor cells from increased purinergic P2X7 receptor activity and inhibited cell proliferation through the activation of purinergic P2Y12 receptor.	pt_BR
dc.description.sponsordocumentnumber	n/a	pt_BR
dc.description.abstractpt	Neste trabalho investigamos as ações de canabinoides e sua relação com o sistema purinérgico sobre a proliferação e a viabilidade celular utilizando como modelo culturas de células de retina embrionária de galinha. Culturas em E7C1 foram tratadas com WIN 55,212-2, um agonista de receptores CB1 e CB2, URB 602, um inibidor da enzima MAGL, e com ATP e ADP. WIN e URB 602 inibiram a proliferação tanto das culturas controle quanto das culturas tratadas com ATP e ADP. A redução da proliferação sugere um arresto do ciclo celular, diferenciação e/ou morte celular. Na retina de galinha já foi descrito que os receptores P2X7 participam de fenômenos de morte celular. Para investigar o envolvimento dos receptores P2X7 na morte celular induzida por WIN, culturas em E7C1 foram tratadas com WIN e A438079, um inibidor dos receptores P2X7, e submetidas ao ensaio de viabilidade celular. WIN diminuiu a viabilidade celular de forma dose-dependente, sendo este efeito completamente bloqueado pelo A 438079. Entretanto, A438079 não reverteu o efeito de WIN sobre a incorporação de [3H]-timidina, sugerindo que a participação de receptores P2X7 em culturas tratadas com WIN esteja restrita a fenômenos de morte celular. Uma das formas de se estudar a atividade de receptores P2X7 é através de ensaios de captação de corante fluorescente. Culturas de E7C1 tratadas com WIN durante 24h apresentaram um aumento de ~2x no número de células positivas para o corante fluorescente sulforodamina B (SRB). Além disso, culturas pré-incubadas com WIN durante 24h e estimuladas com ATP 3mM por 10 min., apresentaram um aumento de ~4x no número de células positivas para SRB, sendo este efeito totalmente bloqueado por A438079. Na retina de ratos já foi descrito que o receptor P2Y12 está envolvido com a saída do ciclo celular. Culturas de E7C1 foram tratadas com WIN e PSB0739, um antagonista de receptores P2Y12 e submetidas ao ensaio de incorporação de [3H]-timidina. PSB 0739 inibiu o efeito de WIN sobre a proliferação. Nossos resultados sugerem que canabinoides possuem efeito inibitório sobre a proliferação celular, com efeito irreversível sobre a proliferação induzida por nucleotídeos. Induziram ainda a morte de células progenitoras da retina, a partir do aumento da atividade dos receptores purinérgicos P2X7 e inibiu a proliferação celular através da ativação do receptor purinérgico P2Y12.	pt_BR
dc.subject.pt	Canabinoides	pt_BR
dc.subject.pt	Purinérgicos	pt_BR
dc.subject.pt	Retina	pt_BR
dc.subject.pt	Receptores Purinérgicos P2X7	pt_BR
dc.subject.pt	Receptores Purinérgicos P2Y12	pt_BR