Efeito da lactoferrina bovina em linhagens celulares tumorigênicas da próstata humana

Rocha, Vanessa Pimenta

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dc.contributor.advisor	Gonçalves, Rafael Braga
dc.contributor.author	Rocha, Vanessa Pimenta
dc.date.accessioned	2019-05-10T18:17:56Z
dc.date.available	2019-05-10T18:17:56Z
dc.date.issued	2019-03-27
dc.identifier.citation	ROCHA, Vanessa Pimenta. Efeito da lactoferrina bovina em linhagens celulares tumorigênicas da próstata humana. 2019. 97 f. Dissertação (Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular e Celular) - Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2019.	pt_BR
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/unirio/12772
dc.description.sponsorship	CAPES	pt_BR
dc.language.iso	Portuguese	pt_BR
dc.rights	openAccess	pt_BR
dc.title	Efeito da lactoferrina bovina em linhagens celulares tumorigênicas da próstata humana	pt_BR
dc.title.alternative	Effect of bovine lactoferrin on human prostate tumorigenic cell lines	pt_BR
dc.type	masterThesis	pt_BR
dc.contributor.advisor-co	Teodoro, Anderson Junger
dc.contributor.referee	Gonçalves, Rafael Braga
dc.contributor.referee	Albuquerque, Cassiano Felippe Gonçalves de
dc.contributor.referee	Moraes, Gabriela Nestal de
dc.contributor.referee	Costa, Danielly Cristiny Ferraz da
dc.contributor.referee	Trindade, Pablo
dc.degree.department	CCBS	pt_BR
dc.degree.grantor	Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro - UNIRIO	pt_BR
dc.degree.level	Mestrado Acadêmico	pt_BR
dc.degree.local	Rio de Janeiro, RJ	pt_BR
dc.degree.program	Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular e Celular	pt_BR
dc.subject.cnpq	CIÊNCIAS BIOLÓGICAS	pt_BR
dc.subject.cnpq	BIOQUÍMICA	pt_BR
dc.subject.cnpq	BIOLOGIA MOLECULAR	pt_BR
dc.subject.en	Anticancer activity	pt_BR
dc.subject.en	Bovine lactoferrin	pt_BR
dc.subject.en	Prostatic Neoplasms	pt_BR
dc.description.abstracten	Prostate cancer is the second most frequent type of cancer and the largest fourth cause of death by cancer worldwide. The cellular and molecular processes underlying the pathogenesis, development and controlling of prostate cancer are poorly understood. Bovine lactoferrin (bLf) is an 80 kDa glycoprotein from transferrin family, found in body fluids. It’s an iron binding protein. It’s a multifunctional protein that has been widely associated with immunologic effects and anticancer activity, besides other functions. The aim to evaluate the influence of bLf on tumorigenic human prostate cell lines. For this, the prostate cancer cell lines PC-3 and DU-145 were used. The possible morphological changes were analyzed in the optical microscope with bLf in 24 and 48 hours. MTT assays and trypan blue counts were used to analyze apo-bLf and holo-bLf cytotoxicity at concentrations of 0.5 to 40 mg/ml at 24 and 48 hours of treatment. Using flow cytometry, proliferation, cell cycle and apoptosis assays were performed to monitor cell and neoplastic growth kinetics with and without bLf treatment,. Confocal microscopy with FITC-bLf was used to observe internalization and cellular damage within 24 hours of treatment. For a general and specific evaluation of cell death and reactive oxygen species evaluation, cells were live-imaged using the high-throughput system Operetta. Fluorescent labeling was analyzed with Harmony High-Content Analysis software. The results of cell morphology and viability demonstrated that bLf induced cell death in a dose and time-dependent manner in DU-145 and PC-3 cells compared to control. It was possible to observe that FITC-bLf internalizes in DU-145 cells. Apo-bLf inhibited cell proliferation, altered cell cycle and increased cell death by necrosis and apoptosis in the PC-3 cell. In the DU-145 both apo-bLf form and the holo-bLf form induced cell cycle arrest in the G0/G1 phase. It also increased the level of activated caspases 3/7 and oxidative stress levels. Our data confirm that bLf, in its apo- and holo- form, induces cell death in a time and dose-dependent manner in PC-3 and DU-145 lines. It appears to be a potent inhibitor of cell growth and arrest in the cell cycle through induction of apoptosis-programmed cell death. Suggesting that bLf has an important antitumor action on human prostate cancer cell lines.	pt_BR
dc.degree.country	Brasil	pt_BR
dc.description.sponsordocumentnumber	n/a	pt_BR
dc.description.abstractpt	O câncer de próstata é o segundo tipo mais frequente de câncer e a quarta maior causa de morte por câncer no mundo. Os processos celulares e moleculares subjacentes à patogênese, desenvolvimento e controle do câncer de próstata são pouco compreendidos. A lactoferrina bovina (bLf) é uma glicoproteína de 80 kDa da família da transferrinas, encontrada nos fluidos corporais. É uma proteína de ligadora de ferro, multifuncional, e que tem sido amplamente associada a efeitos imunológicos e atividade anticancerígena, além de outras funções. O objetivo do estudo foi de avaliar a influência da bLf em linhagens tumorigênicas de células da próstata humanas. Para isso, foram utilizadas as linhagens de câncer se próstata PC-3 e DU-145. As possíveis alterações morfológicas foram analisadas no microscópio óptico com a bLf em 24 e 48 horas. Os ensaios de MTT e contagem por azul de tripan foram utilizados para analisar a citotoxicidade da apo-bLf e da holo-bLf em concentrações de 0,5 a 40 mg/ml em 24 e 48 horas de tratamento. Utilizando a técnica de Citômetria de fluxo foram feitos ensaios de proliferação, ciclo celular e apoptose para acompanhar à cinética do crescimento celular e neoplásico com e sem o tratamento com a bLf. A microscopia confocal com a FITC-bLf foi usada para observar internalização e dano celular em 24h de tratamento. Para uma avaliação geral e específica da morte celular e do aumento do estresse oxidativo (espécies reativas de oxigênio – ROS), as células foram fotografadas ao vivo usando o sistema de alta produtividade Operetta. A marcação fluorescente foi analisada com o software Harmony High-Content Analysis. Os resultados de morfologia celular e da viabilidade mostram que a bLf induziu morte celular de forma dose e tempo-dependente com o tratamento em células DU-145 e PC-3 em comparação ao controle. Foi possível observar que a FITC-bLf internaliza em células DU-145. A apo-bLf inibiu a proliferação celular, alterou o ciclo celular e aumentou a morte celular por necrose e apoptose na célula PC-3. Na linhagem DU-145, tanto a forma apo-bLf como a forma holo-bLf induziram um arresto no ciclo celular na fase G0/G1. Também aumentou o nível de caspases 3/7 ativadas e os níveis de estresse oxidativo. Nossos dados confirmam que o bLf, na sua forma apo- e holo-, induz a morte celular de maneira dependente do tempo e da dose nas linhagens PC-3 e DU-145. Parece ser um potente inibidor do crescimento celular e arresto no ciclo celular, através de indução de morte celular programada por apoptose. Sugerindo assim, a bLf tendo uma importante ação antitumoral nas linhagens celulares de câncer de próstata humano.	pt_BR
dc.subject.pt	Atividade anticancerígena	pt_BR
dc.subject.pt	Lactoferrina bovina	pt_BR
dc.subject.pt	Neoplasias da Próstata	pt_BR