Ativação da apoptose mediada por Lactoferrina Bovina (bLf) em células Vero

Almeida, Matheus Augusto Patricio de

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Centro de Ciências Biológicas e da Saúde (CCBS)
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dc.contributor.advisor	Gonçalves, Rafael Braga
dc.contributor.author	Almeida, Matheus Augusto Patricio de
dc.date.accessioned	2019-10-08T16:22:29Z
dc.date.available	2019-10-08T16:22:29Z
dc.date.issued	2019-06-07
dc.identifier.citation	ALMEIDA, Matheus Augusto Patricio de. Ativação da apoptose mediada por Lactoferrina Bovina (bLf) em células Vero. 2019. 68 f. Dissertação (Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular e Celular) - Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2019.	pt_BR
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/unirio/12935
dc.description.sponsorship	CAPES	pt_BR
dc.language.iso	Portuguese	pt_BR
dc.rights	openAccess	pt_BR
dc.title	Ativação da apoptose mediada por Lactoferrina Bovina (bLf) em células Vero	pt_BR
dc.title.alternative	Triggering of Apoptosis by bovine lacferrin in Vero cells	pt_BR
dc.type	masterThesis	pt_BR
dc.contributor.advisor-co	Carvalho, Carlos Alberto Marques de
dc.contributor.referee	Gonçalves, Rafael Braga
dc.contributor.referee	Trindade, Pablo
dc.contributor.referee	Carlétti, Ísis Moraes Ornelas
dc.contributor.referee	Albuquerque, Cassiano Felippe G. de
dc.contributor.referee	Souza, Theo Luiz Ferraz de
dc.degree.department	CCBS	pt_BR
dc.degree.grantor	Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro - UNIRIO	pt_BR
dc.degree.level	Mestrado Acadêmico	pt_BR
dc.degree.local	Rio de Janeiro, RJ	pt_BR
dc.degree.program	Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular e Celular	pt_BR
dc.subject.cnpq	CIÊNCIAS BIOLÓGICAS	pt_BR
dc.subject.cnpq	BIOQUÍMICA	pt_BR
dc.subject.cnpq	BIOLOGIA MOLECULAR	pt_BR
dc.subject.en	Apoptosis	pt_BR
dc.subject.en	Vero Cells	pt_BR
dc.subject.en	Bovine lactoferrin	pt_BR
dc.description.abstracten	Bovine lactoferrin (bLf) is a glycoprotein with 80 kDa belonging to the transferrin family. It can be found in many organic fluids such as tears, saliva and milk. This iron-binding protein is encountered in two forms: iron-free (apo-bLf) and iron-saturated (holo-bLf). Its vast range of functions has been intensively studied, like the antimicrobial, antiviral, anticarcinogenic and anti-inflammatory properties, by which lactoferrin acts enhancing the levels of cytokines and pro-apoptotic proteins leading the cell to programmed death. Despite all the research, the effects of bLf in the cell death mechanism and pathways are yet to be unraveled. This study aims to verify whether apo-bLf and holo-bLf induces apoptosis and the pathways affected by it. The cytotoxicity effect of bLf was measured by MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] assay, with concentrations ranging from 2 to 20 mg/mL with 3-day incubation. Flow citometry was used to analyze early apoptosis and necrosis events using annexin V and 7AAD markers. Besides, caspase-3/7 activity was assessed using Caspase-Glo 3/7 Assay (Promega®). Our results showed that apo-bLf has a negative effect on Vero cell viability, reducing it by 15% at 2 mg/mL and reaching a reduction of up 70% at higher concentrations. This can be correlated with the results observed by flow cytometry, which pointed out signals for annexin V mostly after 24 and 48 hour-incubation and strong signals for 7AAD marker after 72 hour-incubation, suggesting early apoptosis and apoptosis followed by necrosis events respectively. We also observed that caspase-3/7 activity increased by around 60% when Vero cells were treated with apo-bLf. This study showed that apo-bLf leads Vero cells to death; our next steps are to extend these analyses to holo-bLf and determine which apoptotic pathway are affected by both forms of bLf.	pt_BR
dc.degree.country	Brasil	pt_BR
dc.description.sponsordocumentnumber	n/a	pt_BR
dc.description.abstractpt	A lactoferrina bovina (bLf) é uma glicoproteína de 80 kDa pertencente à família das transferinas. Podendo ser encontrada em muitos fluidos orgânicos, como lágrimas, saliva e leite. Esta proteína ligadora de ferro é encontrada em duas formas: livre de ferro (apo-bLf) e saturada de ferro (holo-bLf). Sua vasta gama de funções tem sido intensamente estudada tais como, as propriedades antimicrobianas, antivirais, anticarcinogênicas e anti-inflamatórias, pelas quais a lactoferrina atua aumentando os níveis de citocinas e proteínas pró-apoptóticas levando a célula à morte programada. Apesar de toda a pesquisa, os efeitos de bLf no mecanismo de morte celular e vias ainda estão por ser desvendados. Este estudo tem como objetivo verificar se a apo-bLf e a holo-BLf induzem a apoptose e as vias afetadas por ela. O efeito de citotoxicidade da bLf foi medido pelo ensaio MTT [3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazólio], com concentrações variando de 2 a 20 mg / mL com 3 dias de incubação. A citometria de fluxo foi utilizada para analisar eventos precoces de apoptose e necrose usando os marcadores anexina V e 7AAD. Além disso, a atividade da caspase-3/7 foi avaliada usando o Caspase-Glo 3/7 Assay (Promega®). Nossos resultados mostraram que a apo-bLf tem um efeito negativo na viabilidade das células Vero, reduzindo-a em 15% a 2 mg / mL e alcançando uma redução de até 70% em concentrações mais altas. Isto pode ser correlacionado com os resultados observados por citometria de fluxo, que indicou sinais de anexina V principalmente após 24 e 48 horas de incubação e sinais fortes para o marcador 7AAD após 72 horas de incubação, sugerindo apoptose precoce e apoptose seguido por eventos de necrose respectivamente. Observamos também que a atividade da caspase-3/7 aumentou cerca de 60% quando as células Vero foram tratadas com apo-bLf. Este estudo mostrou que a apo-bLf leva as células Vero à morte; Nossos próximos passos são estender essas análises para holo-BLf e determinar quais vias apoptóticas são afetadas por ambas as formas de bLf.	pt_BR
dc.subject.pt	Lactoferrina bovina	pt_BR
dc.subject.pt	Apoptose	pt_BR
dc.subject.pt	Células Vero	pt_BR