Otimização da cultura de linfócitos T humanos

Souza, Carolina Moraes de

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Centro de Ciências Biológicas e da Saúde (CCBS)
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BIOM - Trabalhos de Conclusão de Curso - Graduação
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dc.contributor.advisor	Bento, Cleonice Alves de Melo
dc.contributor.author	Souza, Carolina Moraes de
dc.date.accessioned	2020-01-29T14:35:32Z
dc.date.available	2020-01-29T14:35:32Z
dc.date.issued	2019-04-05
dc.identifier.citation	SOUZA, Carolina Moraes de. Otimização da cultura de linfócitos T humanos. 2019. 57 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Biomedicina) - Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro, Instituto Biomédico, Rio de Janeiro, 2019.	pt_BR
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/unirio/13056
dc.description.sponsorship	n/a	pt_BR
dc.language.iso	Portuguese	pt_BR
dc.rights	openAccess	pt_BR
dc.title	Otimização da cultura de linfócitos T humanos	pt_BR
dc.title.alternative	Human T cell culture optimization	pt_BR
dc.type	bachelorThesis	pt_BR
dc.contributor.referee	Bento, Cleonice Alves de Melo
dc.contributor.referee	Silva, Agostinho de Lima e
dc.contributor.referee	Lopes, Lana Márcia Ferreira
dc.degree.department	CCBS	pt_BR
dc.degree.grantor	Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro - UNIRIO	pt_BR
dc.degree.level	Graduação	pt_BR
dc.degree.local	Rio de Janeiro, RJ	pt_BR
dc.subject.cnpq	Outros	pt_BR
dc.subject.cnpq	Biomedicina	pt_BR
dc.subject.en	T-Lymphocytes	pt_BR
dc.subject.en	Cell culture	pt_BR
dc.subject.en	Fed-Batch	pt_BR
dc.subject.en	Perfusion	pt_BR
dc.description.abstracten	The development of cell-based therapies brought new horizons and challenges. Although promising, these interventions present many limitations, among those, one can be highlighted: manufacturing. Furthermore, culturing viable human cells is challenging. The main goal of the study was to evaluate chemical and physical parameters of a lymphocytic cell lineage kept under different conditions. On the agitation strategies, flasks kept under 105 rpm agitation had the best performance when it comes to viable cell density. Though, flasks kept under 85 rpm agitation presented better cell circularity. Na+ concentration was significantly higher on flasks under 85 rpm compared to 105 rpm. Ammonia concentration was significantly superior on flaks kept on alternated agitation compared to 105 rpm. We can highlight that osmolality increases and pH decreases over time. The pH presented a significant decrease on the flasks exposed to 105 rpm agitation. Nutrition strategies also impacted on physical and chemical parameters of Jurkat cell line. Viable cell density was significantly higher on flasks under perfusion. Cell viability was kept over 90% during the whole experiment on the flasks under perfusion, when flasks under Fed-Batch decreased to around 60% viability. We noticed a smaller decrease on cell circularity and cell diameter on flasks under perfusion. The fluctuation on K+ and Na+ levels was significantly smaller on flasks under perfusion. Flasks under Fed-Batch presented smaller fluctuations when it comes to glucose and glutamine concentrations. Flasks under perfusion presented lower ammonia concentration between days 2 and 5 when compared to Fed-Batch. Although, between days 6 and 9 presented higher levels when compared to Fed-Batch. Furthermore, flasks under perfusion presented a smaller lowering of pH level. The osmolality had a smaller decrease on flasks under perfusion. Therefore, the best performance was achieved by flasks under perfusion. Having in mind the development of cell-based therapies, the optimal agitation speed is 85 rpm, once it presented a higher cell viability and cell morphology was less affected.	pt_BR
dc.description.sponsordocumentnumber	n/a	pt_BR
dc.description.abstractpt	O surgimento de terapias imunocelulares trouxe além de esperança para pacientes oncológicos, novos desafios. Apesar de promissoras, essas intervenções apresentam inúmeras limitações, entre elas, destaca-se o longo tempo demandado para sua preparação. Ademais, o cultivo sustentável de células humanas biologicamente viáveis é desafiador. Nesse sentido, o objetivo do presente estudo foi avaliar parâmetros físicos e químicos de células de linhagem linfocítica mantidas em cultura sob diferentes condições experimentais. Nas estratégias de agitação, as culturas mantidas à 105 rpm apresentaram o melhor desempenho no que diz respeito à densidade de células viáveis. No entanto, células mantidas à 85 rpm apresentaram circularidade superior. A concentração do íon Na+ foi significativamente maior nos frascos de cultura mantidos à 85 rpm quando comparado à 105 rpm. A concentração de amônia, foi significativamente superior em culturas expostas à agitação alternada quando comparada a velocidade de 105 rpm. Observou-se que, enquanto a osmolaridade aumenta, o pH diminui ao longo do tempo de cultura, tendo esse apresentado uma redução significativamente maior no grupo exposto à agitação a 105 rpm. Estratégias de nutrição distintas também impactaram nos parâmetros físicos e químicos da linhagem de células Jurkat. A densidade de células viáveis foi maior no grupo sob a estratégia de perfusão. A viabilidade celular no grupo sob perfusão se manteve acima de 90% durante todo o experimento, enquanto no grupo sob Fed-Batch observou-se uma redução, e a mesma ficou próxima de 60%. Destaca-se uma menor diminuição na circularidade celular no grupo submetido à perfusão, fenômeno também observado no diâmetro celular desse grupo. A variação na concentração dos íons K+ e Na+ foi significativamente menor no grupo submetido à perfusão. As culturas sob Fed-Batch apresentaram flutuações menos drásticas no que diz respeito às concentrações de glicose e glutamina. A estratégia de perfusão apresentou concentração de amônia menor que Fed-Batch entre os dias 2 e 5, e maior entre os dias 6 e 9. Ademais, o pH da cultura submetida à perfusão sofreu menor redução. O grupo sob perfusão apresentou menor redução na osmolaridade. Portanto, no geral, o melhor desempenho foi obtido pelas células submetidas à perfusão. Tendo em mente o desenvolvimento de terapias imunocelulares, a velocidade de agitação ótima é 85 rpm, pois além de maior percentual de células viáveis, a morfologia dessas células foi menos afetada.	pt_BR
dc.subject.pt	Linfócitos T	pt_BR
dc.subject.pt	Cultura de Células	pt_BR
dc.subject.pt	Fed-Batch	pt_BR
dc.subject.pt	Perfusão	pt_BR
dc.degree.course	Bacharelado em Biomedicina	pt_BR
dc.degree.college	Instituto Biomédico	pt_BR